はじめに：RT-qPCRって何？
RT-qPCR（アールティー・キューピーシーアール）とは、
「RNAをDNAに変換し、それをリアルタイムで定量するPCR」
のことです。
正式には「Reverse Transcription quantitative PCR（逆転写定量PCR）」と呼ばれ、RNAの量を正確に測るために使われています。
どういうときにRT-qPCRを使うの？
- ウイルスRNA（例：新型コロナウイルス）を検出
- 細胞の**遺伝子発現量（mRNA）**を調べる
- 遺伝子治療や創薬の効果検証など、医療・バイオ研究の必須技術
RNAはそのままではPCRできないため、まずDNA（cDNA）に変換してからPCRを行うのがポイントです。
RT-qPCRの基本ステップ
RT-qPCRは、以下の2段階の反応で行われます：
① 逆転写（RT：Reverse Transcription）
RNAからDNA（cDNA）を作るステップ
→ 酵素「逆転写酵素（リバーストランスクリプターゼ）」を使用
② qPCR（リアルタイムPCR）
cDNAを蛍光を使ってリアルタイムに増幅・定量するステップ
→ 蛍光色素（SYBR Green）やプローブ（TaqMan）を使用
RNA → cDNA → DNAをリアルタイムで測定！
RNA（例：mRNA）
↓ 逆転写（RT）
cDNA（一本鎖のDNA）
↓ qPCR
定量（Ct値で評価）
RNAの量が多いほど、できるcDNAも多くなり、qPCRでのCt値は小さくなります。
Ct値（Cycle threshold）とは？
qPCRと同様に、RT-qPCRでもCt値が重要です。これは、
「蛍光が検出され始めるサイクル数」
のことで、Ct値が小さいほど、もともとのRNA量が多かったことを意味します。
RT-qPCRでよく使う試薬と装置
- 逆転写酵素（例：SuperScript, ReverTra Aceなど）
- SYBR Green：DNAに結合して蛍光を発する色素
- TaqManプローブ：特異的なDNAにだけ反応する蛍光プローブ
- サーマルサイクラー（リアルタイムPCR装置）
RT-qPCRの用途まとめ
✅ 感染症検査（ウイルスRNAの検出）
✅ 遺伝子発現解析（mRNAの比較）
✅ miRNA解析、lncRNA解析など
✅ 治療効果・薬剤反応のモニタリング
RT-qPCRとqPCR、通常のPCRの違い
| 項目 | 通常のPCR | qPCR | RT-qPCR |
|---|---|---|---|
| 測定対象 | DNA | DNA | RNA（→ cDNA） |
| 測定 | 定性（ある/なし） | 定量（量） | 定量（RNA量） |
| 特徴 | DNAを増やす | DNAの量を測る | RNAをDNAに変えて測る |
まとめ：RT-qPCRはRNAの“量”を測る技術！
🔹 RT-qPCRはRNA（特にmRNA）をリアルタイムで定量する方法
🔹 逆転写 → qPCRの2段階で行う
🔹 Ct値でRNA量の差を比較できる
🔹 感染症、がん研究、遺伝子発現解析に欠かせない
よくある質問（FAQ）
Q. RNAはそのままPCRできますか？
→ できません。必ずcDNAに変換（逆転写）してからPCRします。
Q. RNAの定量は何に使えるの？
→ 遺伝子の「発現量」がわかるため、病気の診断や治療効果の確認に使われます。
Q. qPCRとRT-qPCRの違いは？
→ 測定対象が違います。qPCRはDNA、RT-qPCRはRNA（をcDNAにして）を測ります。